R-PE 藻紅蛋白

簡(jiǎn)要描述：R-PE 藻紅蛋白是從紅藻中分離純化的，能發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，具有很好的吸光性能和很高的量子產(chǎn)率，在可見(jiàn)光譜區(qū)有很寬的激發(fā)及發(fā)射范圍。用常規(guī)的標(biāo)記方法可以很方便地將其與生物su、親和素和各種單克隆抗體結(jié)合起來(lái)制成熒光探針，用于熒光顯微檢測(cè)、熒光免疫測(cè)定、雙色或多色熒光分析、癌細(xì)胞表面抗原檢測(cè)、流式細(xì)胞熒光測(cè)定等抗體熒光標(biāo)記以及活體成像應(yīng)用等診斷及生物工程技術(shù)。

產(chǎn)品型號(hào)：78GD10007
廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商
更新時(shí)間：2023-11-30
訪問(wèn) 量：2559

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應(yīng)用領(lǐng)域	生物產(chǎn)業(yè)

R-PE 藻紅蛋白產(chǎn)品描述

藻紅蛋白是從紅藻中分離純化的，能發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，具有很好的吸光性能和很高的量子產(chǎn)率，在可見(jiàn)光譜區(qū)有很寬的激發(fā)及發(fā)射范圍。用常規(guī)的標(biāo)記方法可以很方便地將其與生物su、親和素和各種單克隆抗體結(jié)合起來(lái)制成熒光探針，用于熒光顯微檢測(cè)、熒光免疫測(cè)定、雙色或多色熒光分析、癌細(xì)胞表面抗原檢測(cè)、流式細(xì)胞熒光測(cè)定等抗體熒光標(biāo)記以及活體成像應(yīng)用等診斷及生物工程技術(shù)。

R-PE 藻紅蛋白產(chǎn)品性質(zhì)

分子量：約 240,000 道爾頓

組成：蛋白的亞基組成為(alpha-beta)6gamma。每個(gè)alpha-亞基和 beta-亞基約 20,000 道爾頓，每個(gè)

gamma 亞基約 30,000 道爾頓。

純度： Amax/A280 > 5.5

激發(fā)波長(zhǎng)：：450-500 nm

發(fā)射波長(zhǎng)：：575 ± 5 nm

形態(tài)：硫酸銨沉淀

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、該產(chǎn)品為硫酸銨沉淀，將其置換至20mM 磷酸鹽緩沖液中使用。

2、在較寬的 pH 范圍內(nèi)具有較寬的吸收光譜，比較容易選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)，從而得到高效熒光發(fā)射，

且激發(fā)時(shí)有特異的熒光發(fā)射峰；

3、吸光度和熒光量子產(chǎn)率很高，熒光強(qiáng)而穩(wěn)定，靈敏度高；

4、具有較小的熒光背景，不易淬滅，熒光保存期較長(zhǎng)；

5、易與其他分子交聯(lián)結(jié)合，非特異性吸附少；

6、chun天然海洋生物提取，無(wú)任何毒副作用，不含放射性，操作使用非常安全。易與抗體、生物su、

親合素、免疫蛋白等物質(zhì)結(jié)合，制成熒光探針。

使用方法

抗體標(biāo)記（僅供參考）

試驗(yàn)材料：

藻紅蛋白：分子量約 240000 道爾頓；PD-10 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25M) ，安瑪西亞 Amersham公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào) No. 17-0851-01； NAP5 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25 DNA grade)，安瑪西亞Amersham 公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào) No 17-0853-02；琥珀酰亞胺-4-(N- 甲基馬來(lái)酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)，Pierce 公司，產(chǎn)品目錄號(hào) No.22360；N-乙基馬來(lái)酰胺（NEM），Sigma 公司，產(chǎn)品目錄號(hào) E-1271；二甲基亞砜（DMSO），Aldrich 公司，產(chǎn)品目錄號(hào) No. 27,685-5。

試驗(yàn)方法：

1、藻紅蛋白溶液

將藻紅蛋白沉淀復(fù)溶為溶液，用脫鹽柱或超濾管除鹽并將其緩沖液置換為20mM 磷酸鹽緩沖液，調(diào)整藻紅蛋白的最終濃度為5-10毫克/毫升。

2、藻紅蛋白的衍生化

將琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來(lái)酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于無(wú)水二甲基亞砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻紅蛋白添加 11 微升的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來(lái)酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)

(SMCC)，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的氨基與琥珀酰胺反應(yīng)生成衍生化的藻紅蛋白。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠層析柱，將衍生化的藻紅蛋白過(guò)柱，收集藻紅蛋白峰。

3、抗體的處理

二硫蘇糖醇（DTT）溶解于蒸餾水中，配制成 1 摩爾/升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，調(diào)整抗體的濃度，使其濃度至少為 4 毫克/毫升。

每毫升抗體溶液中加入 20 微升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，室溫靜置反應(yīng) 40 分鐘，將抗體的二硫鍵打開(kāi)形成巰基。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠柱，將反應(yīng)液過(guò)柱，收集抗體部分。

4、藻紅蛋白和抗體的共價(jià)交聯(lián)

每毫克抗體加入 3.2 毫克的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來(lái)酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻紅蛋白，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的馬來(lái)酰亞胺基和抗體上的巰基實(shí)現(xiàn)共價(jià)交聯(lián)。

10 毫克的 N-乙基馬來(lái)酰胺（NEM）溶解于 1.0 毫升的無(wú)水二甲基亞砜（DMSO）中制成 N-乙基馬來(lái)酰胺（NEM）母液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。每毫克抗體中加入 3.4 微升N-乙基馬來(lái)酰胺（NEM）母液，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，反應(yīng)后，使抗體上的巰基封閉。

5、交聯(lián)物的存儲(chǔ)

將交聯(lián)物于存儲(chǔ)緩沖液中透析后保存于2-8℃。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作！

本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

運(yùn)輸及保存方法

儲(chǔ)存條件：2-8°C 避光保存，勿冷凍。

穩(wěn)定性：在適宜條件下至少可以儲(chǔ)存12個(gè)月。

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