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Ec UDG酶說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-10-24      點(diǎn)擊次數(shù):378

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產(chǎn)品描述

UDG 酶可催化水解含有尿嘧啶的 DNA 鏈的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的 N-糖苷鍵,釋放游離尿嘧啶。本尿嘧啶 DNA 糖基酶(UDG)來(lái)源于大腸桿菌 ung 基因,經(jīng)重組表達(dá)與多步蛋白純化而得。該酶分子量為 25KDa,催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶,對(duì) RNA 無(wú)活性。

UDG 酶常用于止 防止 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染,其作用原理基于:在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代dTTP 摻入 DNA 中,形成了含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA中 U 堿基的糖苷鍵,降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)新樣本的污染問(wèn)題。由于大腸桿菌 UDG 經(jīng)高溫失活,降溫到低溫后,活性會(huì)部分恢復(fù);因此不建議本酶用于 防止 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。建議利用本公司的熱敏 UDG(目錄號(hào) AE0402)進(jìn)行 防止 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。

產(chǎn)品應(yīng)用

主要應(yīng)用于 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。它的作用原理基于:在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP摻入 DNA 中,形成了含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U堿基的糖苷鍵,降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)新樣本的污染問(wèn)題。

活性定義

37℃反應(yīng)條件下,每分鐘催化 60 pmole 尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為 1 U。

質(zhì)量控制

無(wú)內(nèi)切酶活性:50 U 的本酶和 1 μg 的 pBR322 DNA 在 37℃下反應(yīng) 2 小時(shí),DNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化。

運(yùn)輸與保存

干冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期2年。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作!

本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

備注

長(zhǎng)期儲(chǔ)存 ( 非頻繁使用; 每月 1-2 次 ): -70℃;每天或每周使用: -20℃。盡量避免多次凍融,切勿暴露在溫度波動(dòng)較大之處。溫度波動(dòng)對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。

UDG 可以在 PCR 反應(yīng)前清除不慎污染的 U-DNA 分子,對(duì)于某個(gè) PCR 擴(kuò)增反應(yīng),整個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須在所有的 PCR 反應(yīng)中添加 dUTP,使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為 U-DNA。如僅某次 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)使用 dUTP,T -DNA 仍積累,這個(gè)抗污染系統(tǒng)也難以起到wan全的作用。

UDG/dUTP 系統(tǒng)是 PCR 試劑專(zhuān)用的一種防污染措施,為了防止 PCR 產(chǎn)物的污染,尤其是在臨檢實(shí)驗(yàn)室中反復(fù)擴(kuò)增同一片段時(shí),必須嚴(yán)格規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的區(qū)域劃分和操作。

如果經(jīng)過(guò)換房間、紫外照射、DNase 消化等措施后,依然對(duì)某個(gè)片段存在污染,建議在不同的擴(kuò)增區(qū)重新設(shè)計(jì)引物,以錯(cuò)開(kāi)污染片段。

大腸桿菌 UDG 酶的反應(yīng)溫度可以在 37℃-50℃ 的范圍內(nèi)變化,建議在 37 度反應(yīng),也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在 37-50 ℃范圍內(nèi)自由調(diào)整反應(yīng)溫度。

為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



貨號(hào)品名規(guī)格品牌
78DC10122-200UEc UDG酶200UBIOHUB
78DC10122-1000UEc UDG酶1000UBIOHUB






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